Hervorgegangen aus der Tradition der Diakonissen, die 1859 in Speyer und 1884 in Mannheim ihre pflegerische und soziale Arbeit begonnen haben, beschäftigen die Diakonissen Speyer heute mehr als 5.000 Mitarbeitende. Zudem engagieren sich 580 Ehrenamtliche im Unternehmen.

Die Diakonissen Speyer sind mit über 30 Einrichtungen und Diensten in Rheinland-Pfalz und dem Saarland vertreten, darunter Krankenhäuser, Seniorenzentren, Ambulante Pflegedienste, Einrichtungen für Menschen mit Behinderung, Kindertagesstätten, Hilfen zur Erziehung, Hospize, Ambulante Hospiz- und Palliativberatungsdienste (AHPB), Spezialisierte Ambulante Palliativversorgung (SAPV) sowie Gesundheits-Fachschulen.

Die Arbeit des Werkes steht unter dem biblischen Leitwort, das als Hausspruch der Diakonissen Speyer gilt: Jesus Christus sagt: „Alles, was ihr getan habt einem von diesen meinen geringsten Brüdern, das habt ihr mir getan.“ (Matthäus 25, 40)